A alface (Lactuca sativa L.) é a hortaliça folhosa mais consumida no Brasil. O substrato é um dos fatores a serem considerados para a produção de mudas de qualidade. Esse trabalho objetivou avaliar substratos alternativos no desenvolvimento de mudas de alface. O experimento foi conduzido em casa de vegetação do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Espírito Santo (Ifes), em delineamento inteiramente casualizado, com 3 tratamentos (substrato comercial; substrato a base de palha de feijão e esterco bovino; substrato formado a base de esterco bovino, serragem e terra) e oito repetições. Os resultados sugerem viabilidade na produção de mudas de alface utilizando substrato alternativo à base de esterco bovino e palhada de feijão, este substrato foi responsável pelos maiores valores de matéria fresca, matéria seca, comprimentos e número de folhas.